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本试剂盒细胞增殖检测是基于荧光检测，可以监测细胞健康和通过胸苷掺合来评估DNA合成，从而监测细胞分裂。

溴脱氧尿苷(5-溴代-2'-脱氧尿苷，BrdU)是一种合成的核苷酸类似物。BrdU通常被用于检测活组织中增殖的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中(在细胞周期S期)，在DNA复制中可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。

1. 仪器：微量移液器、低速离心机、平板摇床、流式细胞仪、1.5mL微量离心管
   
2. 试剂：BrdU、70%乙醇、胰酶消化液

1. BrdU是光敏型，故需在避光条件下加入。细胞加了BrdU以后可能光敏感，故需黑暗中培养。
   
2. 加入BrdU的时间和浓度根据细胞的类型和复制时间来确定，范围在15min至2h，浓度从10μM至100μM。例如，处理鼠胚胎成纤维细胞为30μM处理60min。

1. 细胞样本制备及前处理
   
   1. 在最适的环境下培养细胞(细胞密度在临界对数生长期)加入BrdU至终浓度为30μM。避光孵育30～60min。除去BrdU，用PBS洗3次。
      
   2. 吸去培养基，PBS洗一次。
      
   3. 胰蛋白酶消化5～15min。
      
   4. 收集细胞方法见BrdU标记步骤中所示。
2. BrdU标记
   
   1. 收集细胞：1000×g，10min收集细胞，以每管500μL洗涤液重悬离心洗涤2次，调整细胞数在10⁵～10⁶/管。
      
   2. 固定：每管加入500μL 70%乙醇重悬细胞，4℃固定过夜，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800×g，10min。
      
   3. 通透：每管加入500μL通透液重悬细胞，冰上孵育2min，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800×g，10min。
      
   4. DNA变性：以300μL DNA变性工作液重悬细胞，37℃反应30min，以每管500μL洗涤液离心洗涤2次，500～800×g，10min。
      
      1. 计算每次反应所需要的DNA变性工作液总量后，以每300μL变性反应缓冲液加入50μL变性剂混匀后，4℃放置待用。
   5. BrdU标记：以195μL染色缓冲液重悬细胞，加入FITC荧光标记BrdU流式抗体5μL (0.125μg)/每管，4℃避光孵育30min。
      
   6. 流式仪检测：激发波长488nm，发射波长520nm。